一、目的要求
了解食用菌母種培養基的配方,熟悉母種培養基(PDA或PSA)的配制方法，了解高壓蒸汽滅菌鍋的構造，掌握正確使用高壓蒸汽滅鍋的方法.熟悉接種箱的消毒滅菌方法,掌握食用菌母種轉管技術。
二、實訓準備
(1)配制培養基材料：馬鈴薯,葡萄糖(或蔗糖)、瓊脂、水等。
(2)儀器用具：高壓蒸汽滅菌鍋(手提式或立式)，可調式電爐，鋁鍋(20cm)，湯勺，切刀，切板，量杯，紗布，漏斗(帶膠管和玻璃管)，止水夾，漏斗架，試管(18mm×180mm或20mm×200mm)，1cm厚的長方形木條(擺放斜面時墊試管用)，棉花(未脫脂)，捆扎繩，標簽，天平等。
(3)消毒滅菌藥品及設備：高錳酸鉀，37%甲醛溶液，坩堝或燒杯，紫外燈，0.25%新潔爾滅溶液，5%石炭酸溶液，噴霧器等。
(4)轉管材料及用具：平菇試管母各，接種箱，接種鏟，酒精燈，火柴，95%酒精，75%酒精棉球，肥皂等。
三,方法步驟
（1）母種培養基(PDA或PSA)配方：馬鈴薯200g,葡萄糖(或蔗糖)20g，瓊脂15~20g，水1000ml,PH自然。
（2）母種培養基的配制
熬制：先將馬鈴薯洗凈，挖芽去皮，準確稱取200g，然后將馬鈴薯切成玉米大小的顆粒或薄片。用量杯量取1000~1200ml水于鋁鍋內煮馬鈴薯，待水沸后計時20~25min，當馬鈴薯酥而不爛時，用雙層紗布進行過濾于量杯中，洗凈鋁鍋濾渣，將濾液到回鍋中繼續以文火加熱，加入葡萄糖(或蔗糖)和瓊脂，待瓊脂溶化，不斷攪拌，以免糊鍋，注意補足水量。
分裝：將熬成的培養基保持文火，趁熱分裝：用勺將培養基加入漏斗中,左手握2~5支試管，右手持漏斗下面的玻璃管入試管口內，同時放開止水夾，讓培養基逐個流入試管內,培養基高度約為試管長度的1/6~1/5,約10~15ml，注意避免將培養基沾于試管口內外。分裝后的試管，在培養基凝固前必須立放。 制棉塞：用疊放式將未脫脂棉做成棉球,塞入試管口，管口內棉塞底部要求光滑，棉塞側面要求無褶皺，棉塞長度的2/3在管口內，1/3在管口外。棉塞的松緊以手提棉塞輕晃試管不滑出為度，捆把：以10支試管為一捆,用捆扎繩扎緊。貼上標簽，準備滅菌。
（3）培養基的滅菌
手提式高壓滅菌鍋的構造：鍋體，提把，壓力表，安全閥，排氣閥，滅菌鍋腔，篩架，鍋蓋，膠墊圈，緊固螺栓等。 高壓滅菌鍋的使用方法：加水→滅菌物入鍋→上蓋→對稱，均勻地扭緊螺栓→加熱升溫→壓力至0.5kg/cm2時，打開排氣閥排除鍋內冷空氣，壓力降至0,溫度達到121℃時，開始調火穩壓25~30min→滅火，自然降壓到壓力為0.5kg/cm2，可慢慢批開排氣閥徐徐降壓至0(若降壓太快，試管中的培養基易沸騰浸濕棉塞)→鍋蓋半開，讓鍋內多余蒸汽逸出，鍋內的余熱烘干棉塞→開蓋,取物→擺斜面→斜面試管上應覆蓋潔凈的厚毛巾或幾層紗布，防止試管內產生過多的冷凝水。 接種箱的消毒滅菌藥物消毒：首先用0.25%新潔爾滅溶液擦凈接種箱內外.再用5%石炭酸溶液進行接種箱內的噴霧。 熏蒸殺菌：在坩堝或燒杯里倒放37%甲醛溶液10ml/m3，放進接種箱內,再通過接種箱的側門在甲醛溶液加入高錳酸鉀5~8g.甲醛溶液與高錳酸鉀發生強烈的氧化還原反應,立即沸騰并揮發出有強烈刺激的氣體，其中產生的原子氧有較強的殺菌作用。 紫外線燈照射：接種箱的頂部安裝一根30~40W紫外燈,在接種箱玻璃外面覆蓋一層牛皮紙或幾層報紙有機木耳,壓縮秋木耳,食用菌廠家,黑暗中開燈照射才能才能增加殺菌效果，紫外燈照射1h后關燈，待臭氧散后可開始接種。
（4）食用菌母種轉管技術 手及試管的表面消毒：先用肥皂洗手，在用0.25%新潔爾滅溶液浸泡手2min，或以75%酒精棉球擦手和試管表面(包括母種試管和待接種的斜面試管)。在接種箱外的酒精燈的火焰上燃燒試管外的棉塞,即用手捂滅火焰,立即將試管放入接種箱內。
菌種移接(轉管)方法：兩手從接種孔伸入接種箱內，左手持母種管和斜面管并排于拇指和食指間，拇指在上，食指在下。注意兩支試管口對齊于火焰上方，右手持接種鏟，用手背指縫拔掉試管棉塞,使棉塞底部朝外，將接種鏟先蘸取95%酒精，后在火焰中燒灼接種鏟的前段，待冷卻后伸入母管內切取一小塊帶有培養基的菌種塊，迅速移入斜面培養基的中部，菌絲朝上。然后，將右手指縫夾住的棉塞底部及周圍在火焰上燒一下，立即塞入試管口，旋緊棉塞。再換上第二支斜面試管,重復如上操作，注意，菌種移接的整個過程的動作要求做到"快"，"準"，接種鏟不要觸碰管口及管壁。接種后的試管應立即巾標簽,寫上菌號及日期，進行適溫培養。 結束工作：菌種移接完畢,將酒精燈蓋滅，95%酒精瓶蓋上，然后,批開側門，取出試管，將接種箱的汽水擦干，清除箱內的殘留物，將酒精燈，酒精瓶，接種鏟等用具擺放整齊。
